| 更新時(shí)間： | 2025-01-14 |
| 型 號： | |
| 所屬分類： | 醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn) |
| 報(bào) 價(jià)： | 2000 |
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:歡迎咨詢詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。更多實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)請瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容,或來電詳詢!
RNA Pulldown、DNA Pull-down
實(shí)驗(yàn)意義：
核酸與蛋白質(zhì)的互作是細(xì)胞功能的核心，包括蛋白質(zhì)合成、mRNA組裝等生命活動中重要的代謝過程，研究核酸與蛋白質(zhì)的互作是研究生命科學(xué)的基本工具。
實(shí)驗(yàn)原理及步驟
RNA Pull-down:通過體外轉(zhuǎn)錄RNA并用生物素進(jìn)行標(biāo)記，然后與胞漿蛋白混合物共同孵育形成RNA蛋白質(zhì)復(fù)合物，然后用鏈霉親和素標(biāo)記的磁珠分離純化該復(fù)合物(利用生物素與鏈霉親和素的非共價(jià)親和作用)。洗脫后進(jìn)行檢測，如果檢測蛋白為已知蛋白可通過WB進(jìn)行鑒定，如果檢測未知蛋白則可以結(jié)合質(zhì)譜進(jìn)行鑒定。流程為提取細(xì)胞胞漿蛋白樣品液- -體外轉(zhuǎn)錄合成生物素標(biāo)記RNA-共孵育_ -磁珠純化- -洗脫得到互作蛋白. -WB或質(zhì)譜鑒定。
DNA Pull-down:通過合成標(biāo)記有生物素的DNA片段，與細(xì)胞核蛋白混合物共同孵育形成DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物，然后用鏈霉親和素磁珠純化，WB或者質(zhì)譜進(jìn)行檢測鑒定。流程為提取核蛋白樣品液- -合成生物素標(biāo)記DNA-共孵育- -磁珠純化- ~洗脫
得到互作蛋白- -WB或質(zhì)譜鑒定。
結(jié)果展示
RNA Pull-down
DNA Pull-down .
實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
1.實(shí)驗(yàn)周期: 1-2個(gè)月
2.交付標(biāo)準(zhǔn):
RNA Pull-down:探針序列、X光片.實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)步驟、試劑、儀器等)
DNA Pull-down:探針序列、X光片.實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)步驟.試劑、儀器等)
需確認(rèn)信息
1.目的基因種屬及ID號
2.基因序列信息
3.樣本種屬及類型
4.樣本數(shù)量.
5.分析要求
參考文獻(xiàn)
[1]Chen R,Liu Y，Zhuang H，et al. Quantitative proteomics reveals that long non-coding RNA MAL AT1 interacts withDBC1 to regulate p53 acetylation[J]. Nucleic Acids Research, 2017, 45(17):9947-9959.
[2]Tran D H , Shishido Y，Chung S P , et al. lnentication of DNA-binding proteins that interact with the 5-f1anking region
of the human D-amino acid oxidase gene by pull-down assay coupled with two-dimensional gel electrophoresis and
mass spectrometry[J]. Journal of Pharmaceutical & Biomedical Analysis, 2015, 116:94-100.
部分實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)
ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測 | CCK8檢測 | 基因組DNA提取
| 蛋白相互作用分析 |
Western Blot
| 免疫組化 | 熒光定量PCR | 動物模型服務(wù) |
流式細(xì)胞檢測 | 細(xì)胞增殖 | 激光共聚焦 | DNA甲基化實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞劃痕 | 鈣離子濃度檢測 | 掃描電鏡實(shí)驗(yàn) | microRNA 測序 |
動物實(shí)驗(yàn) | Taqman探針 | ATP/ADP檢測
| 石蠟/冰凍切片 |
定點(diǎn)突變 | 線粒體膜電位(MMP)檢測 | 細(xì)胞生長曲線的測定 | 藥理毒理動物實(shí)驗(yàn)
|
免疫共沉淀 | 真核表達(dá)載體構(gòu)建 | 染色質(zhì)免疫沉淀CHIP | 非標(biāo)定量（Label-free）實(shí)驗(yàn) |
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