改良 Lillie-Mayer 蘇木素染色液
產(chǎn)品簡介：
蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯(lián)合染色簡稱 HE 染色，是病理學(xué)和組織學(xué)常用的一種染色方法。蘇木精為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的主要成分是DNA，在DNA 的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易不帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。
改良Lillie-Mayer 蘇木素染色液無毒，無氧化膜，細(xì)胞核染色質(zhì)著色深而細(xì)微，臨床上常替代Harris 蘇木素染色液。對細(xì)胞核染色很清晰，不著染胞質(zhì)和纖維成分，屬進(jìn)行性
染色，故染色后可以不用鹽酸乙醇分化，染色時間約 5～8min，如果是充分氧化后可染色 3～
5min。常用于糖原等特染、酶組化和免疫組化等染色后復(fù)染細(xì)胞核作對照染色，尤其適用 于經(jīng)過特殊染色后不能經(jīng)酸處理時對細(xì)胞核的復(fù)染。在特殊染色中，常不天青石藍(lán)B液聯(lián)合染色，使細(xì)胞核染色后不被后續(xù)的酸性染料所褪色。
染色原理：
1、細(xì)胞核染色的原理：
蘇木素為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA
雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA 雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易不帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。
2、細(xì)胞漿染色的原理：
伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在一定條件下可使細(xì)胞漿著色。細(xì)胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細(xì)胞漿的染色不染液的 pH 值密切相關(guān)。當(dāng)染色液 pH 值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(diǎn)(4.7～5.0)以下時，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細(xì)胞漿帶正電荷，就可 被帶負(fù)電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，不胞漿蛋白質(zhì)帶正
電荷的陽離子結(jié)合，使細(xì)胞漿著色，呈現(xiàn)紅色。
3、分化作用：
染色后，用某些特定的溶液將組織過多結(jié)合的染色劑脫去，這個過程稱為分化作用，所 用的溶液稱為分化液。在HE 染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu)，使組織不色素分離而退色。大多數(shù)組織經(jīng)蘇木素染色后，必須用 1%鹽酸乙醇分化，使細(xì)胞核過多結(jié)合的蘇木素染料和細(xì)胞漿吸附的蘇木素染料脫去，再進(jìn)行伊
紅染色，才能保證細(xì)胞核不細(xì)胞漿染色的分明。
4、返藍(lán)作用：
分化之后，蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下處于藍(lán)色
離子狀態(tài)，呈藍(lán)色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色，立即用水除去組織切 片上的酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木素染上的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，這個過程稱為返藍(lán)作用或藍(lán)化作用。另外用自來水浸洗也可使細(xì)胞核返藍(lán)，但所需時間較長。
產(chǎn)品組成：改良 Lillie-Mayer 蘇木素染色液 100ml 500ml RT 避 光
自備材料：
1、酸性乙醇分化液
2、藍(lán)化液，如稀氨水、碳酸鋰溶液等
3、系列乙醇
4、伊紅染色液
5、4%多聚甲醛
操作步驟(僅供參考)：
(一)石蠟切片染色
1、切片脫蠟至水
①□二甲苯作用 2 次，每次 5～10min。
②□(可選)無水乙醇作用 2 次，每次 3～5min。
③□95%的乙醇 3～5min
④□90%的乙醇 3～5min
⑤□80%的乙醇 3～5min
⑥□自來水或蒸餾水沖洗 1～3min
2、染色
①改良 Lillie-Mayer 蘇木素染色液染色 5～8min
②自來水或蒸餾水沖洗 5～10s
③(可選)鹽酸乙醇分化 2～5s
④自來水沖洗 20～30s
⑤(可選)藍(lán)化液返藍(lán) 20～40s
⑥自來水沖洗 30～60s 3～5min
⑦伊紅染色液染色 3～5min
⑧□自來水沖洗 1～5s
2、脫水、透明、封固
①□80%乙醇 10～20s
②□90%乙醇 10～20s
③□95%乙醇作用 2 次，每次 1～2min。
④□無水乙醇作用 2 次，每次 2～3min。
⑤□二甲苯透明 3 次，每次 2～3min。
⑥□中性樹脂封片。
染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維等呈深淺不一的紅色；角蛋白、紅細(xì)
胞等呈明亮的橙紅色。
(二)冰凍切片染色
1、乙謎醚-乙醇混合固定液 5～10s
2、自來水沖洗 2～5s
3、改良 Lillie-Mayer 蘇木素染色液滴染 1～2min(可加熱至 50℃)。
4、自來水沖洗 2～5s
5、(可選)鹽酸乙醇分化 2～5s
6、自來水沖洗 2～5s
7、(可選)藍(lán)化液返藍(lán) 2～5s
8、自來水沖洗 5～10s
9、伊紅染色液染色 2～5s
10、自來水沖洗 1～2s
11、80%的乙醇 1～2s
12 、95%的乙醇 1～2s
13、無水乙醇 2～5s
14、苯酚二甲苯(1:3) 2～5s
15、二甲苯透明 3 次，每次 2～5s。
16、中性樹脂封片
染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、纖維呈紅色。
(三)細(xì)胞染色
1、4%多聚甲醛固定 10～20min。
2、自來水沖洗 2 次，每次 2min。
3、蒸餾水沖洗 2 次，每次 2min。
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