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口蹄疫病毒（通用型）檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法）說(shuō)明書(shū) |
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口蹄疫病毒（通用型）檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法）說(shuō)明書(shū) 【產(chǎn)品名稱】 通用名稱：口蹄疫病毒（通用型）檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法） 英文名稱：Foot and Mouth Disease Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method) 【包裝規(guī)格】 25T/盒 & 50T/盒 【預(yù)期用途】 口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus，F(xiàn)MDV) 屬于小RNA病毒科，口蹄疫病毒屬，主要侵害偶蹄獸，有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia-I七個(gè)血清型。口蹄疫發(fā)病以發(fā)熱、口腔黏膜及蹄部和乳房皮膚發(fā)生水泡和潰爛為特征，是獸疫局規(guī)定的A類傳染病，易通過(guò)空氣傳播，傳染性強(qiáng)，流行迅速，偶爾感染人。由于口蹄疫傳播迅速、難于防治、補(bǔ)救措施少，被稱為畜牧業(yè)的“*殺手”。 本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理，定性檢測(cè)口蹄疫通用型病毒，對(duì)口蹄疫病毒引起的偶蹄獸類病的診斷和監(jiān)控具有重要指導(dǎo)意義。 【檢驗(yàn)原理】 本試劑盒針對(duì)口蹄疫病毒通用型的高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針，在反應(yīng)體系中含口蹄疫病毒通用型基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào)。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過(guò)程中相應(yīng)通道信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析。 【主要組成成份】
注：陰性對(duì)照為偶蹄獸類基因組DNA，陽(yáng)性對(duì)照為失去活性的口蹄疫病毒cDNA。 【儲(chǔ)存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月。 【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列、湖南潤(rùn)美系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。 【樣本要求】 新鮮采集的咽拭子、皰疹液和糞便標(biāo)本，并使用滅菌生理鹽水懸浮。 2.應(yīng)避免標(biāo)本間交叉污染。 3.標(biāo)本收集后可立即檢測(cè)；若不能立即檢測(cè)，可置于2～8℃冷藏過(guò)夜保存；如需長(zhǎng)期保存，標(biāo)本應(yīng)凍存于-80℃以下，避免反復(fù)凍融。 【檢驗(yàn)方法】 1. 試劑準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)） （1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實(shí)驗(yàn)所需試劑，充分融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著液體。 （2）核算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的反應(yīng)數(shù)（n），并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的各種試劑量。 n =陰性對(duì)照數(shù)（1T）+陽(yáng)性對(duì)照數(shù)（1T）+誤差預(yù)留量（1T）+樣本數(shù)
(3)在無(wú)菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。 2.樣本準(zhǔn)備（樣本處理區(qū)） 用本公司病毒核酸提取試劑盒提取RNA，具體操作按照其試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。 3.加樣 在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測(cè)標(biāo)本RNA各5 μL、終體積25 μL/管，蓋好PCR反應(yīng)管蓋，混勻后瞬時(shí)低速離心，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照品，終體積為25 μL/管，蓋好PCR反應(yīng)管蓋，混勻后瞬時(shí)低速離心，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。 4. PCR（PCR擴(kuò)增區(qū)） （1）取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管，放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置，并記錄放置順序。 （2）按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
注：ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時(shí)不選ROX校正，設(shè)置淬滅基團(tuán)選擇None。 【陽(yáng)性判斷值或者參考區(qū)間】 1.試劑盒有效性判定： （1）陽(yáng)性對(duì)照：有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。 （2）陰性對(duì)照：Ct值＞38或無(wú)Ct值，線形為直線或輕微斜線，無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期。 2.標(biāo)本結(jié)果判定： （1）陽(yáng)性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期。 （2）可疑：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期，則判定為陽(yáng)性，否則為陰性。 （3）陰性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值＞38或無(wú)Ct值。 【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
【檢驗(yàn)方法的局限性】
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 產(chǎn)品的低檢出限為102 Copies/mL，產(chǎn)品CV值≤5%。 【注意事項(xiàng)】
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