氯霉素快速檢測試劑盒說明書 一、原理 本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物氯霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗氯霉素抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物氯霉素的含量成負相關(guān)，與標準曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物氯霉素的含量。 二、試劑盒特性 - 試劑盒靈敏度： 0.02ppb
- 孵育溫度： 25℃
- 孵育時間： 30min～15min
- 樣本檢測限
組織、蜂蜜、牛奶···································· 0.1ppb 奶粉、蛋類、尿樣、飼料··························· 0.15ppb 氯霉素 ·············································· 100% 甲砜霉素 ········································· < 0.1% 氟甲砜霉素 ······································ < 0.1% 組織、蛋類、奶粉····························· 85%±20% 蜂蜜、牛奶、飼料····························· 93%±25% 尿樣·········································· 100%±25% 三、試劑盒組成 1 | 微量測試孔 | 每條8孔，一板12條 | 2 | 標準液×6瓶 （1ml/瓶） | 0ppb | 0.02ppb | 0.06ppb | 0.18ppb | 0.54ppb | 1.62ppb | 3 | 酶標記物 | 7ml | 紅色帽 | 4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 | 5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 | 6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 | 7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 | 8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 | 9 | 2X濃縮復(fù)溶液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑 具備的儀器：酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹儀、恒溫箱 微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道 30～300 µl 試 劑：乙酸乙酯、正己烷 五、樣本前處理步驟 （a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。 （b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。 配液1 樣本復(fù)溶液： 將2X濃縮復(fù)溶液用去離子水按1：1稀釋。 （a）肌肉組織樣本處理方法 - 稱取均質(zhì)后的新鮮樣本3±0.05g于50ml離心管中，加入3ml去離子水后再加入6ml乙酸乙酯，振蕩1min，室溫4000r/min以上離心10min；
- 取出4ml上層液體在50-60℃氮氣流中吹干；
- 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物，再加1ml樣本復(fù)溶液混合30s，室溫4000r/min以上離心10min；去除上層有機相；
- 取50 µl下層相用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 0.5倍 此方法無法檢測肝臟類樣本，處理時易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，影響檢測結(jié)果(乳化時建議處理方法：去除上層有機相再加入2ml正己烷混合30s，室溫4000r/min以上離心10min；去除上層有機相)。 （b）蜂蜜處理方法 - 稱取2±0.05 g蜂蜜，放入離心管中，用2ml去離子水溶解；加入6ml乙酸乙酯振蕩1min，室溫4000r/min以上離心10min；
- 移取3ml上層清澈液到另一離心管中，50-60℃氮氣流下干燥；用0.5ml樣本復(fù)溶液溶解干燥的殘留物，混合30s；
- 取50 µl用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)： 0.5倍 （c）牛奶、奶粉、蛋類樣本處理方法 - 稱取均質(zhì)后的新鮮樣本2±0.05g（或2ml）于50ml離心管中，加入6ml乙酸乙酯，振蕩1min，室溫4000r/min以上離心10min；
- 取出3ml上層液體在50-60℃氮氣流中吹干；
- 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物，再加1ml樣本復(fù)溶液混合30s，室溫4000r/min以上離心10min；去除上層有機相；
- 取50 µl下層相用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 1倍 處理時如無法取到3ml上層液體，可以重復(fù)離心后再取液，或加入10ml乙酸乙酯后取5ml吹干，稀釋倍數(shù)不變。 （d）尿樣、飼料樣本處理方法 - 稱取均質(zhì)后的新鮮樣本1±0.05g（或1ml）于50ml離心管中，加入6ml乙酸乙酯，振蕩1min，室溫4000r/min以上離心10min；
- 取出3ml上層液體在50-60℃氮氣流中吹干；
- 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物，再加1ml樣本復(fù)溶液混合30s，室溫4000r/min以上離心10min；去除上層有機相；
- 取50 µl下層相用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 2倍 六、 酶標免疫分析程序: - 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
- 使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
- 在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
- 所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。
- 從2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
- 取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
- 配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
- 編號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
- 加標準品/樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加入酶標記物50µl/孔，后加入抗體工作液50µl/孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻。25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。
- 將孔內(nèi)液體甩干，用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板4～5次，每次間隔15～30秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
- 顯色：加入底物A液50µl/孔，再加入底物B液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。
- 測定：加入終止液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，5min內(nèi)讀數(shù)），測定每孔OD值。
七、結(jié)果判定 結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含氯霉素量成負相關(guān)。 1、粗略判定： 用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.143； 0.02ppb為1.816；0.06ppb為1.415；0.18ppb為0.74；0.54ppb為0.313；1.62ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是0.54ppb～1.62ppb；樣本2的濃度范圍是0.06ppb～0.18ppb，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素實際濃度。 2、定量分析 （1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以di一個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即 B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值 （2）標準曲線的繪制與計算 以標準品百分吸光率為縱坐標，以氯霉素標準品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素實際濃度。 若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（歡迎索取） 八、 注意事項 - 室溫低于25℃或試劑及標本未回到室溫（20～25℃）會導(dǎo)致所有標準的OD值偏低。
- 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著標準曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
- 混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
- 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
- 不要使用過了有效日期的試劑盒；稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化；不要交換使用不同批號的盒中試劑。
- 不用的微孔板放進自封袋重新密封；標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
- 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時，表示試劑可能變質(zhì)。
- 該試劑盒zui佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
九、儲藏條件和保質(zhì)期 - 儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。
- 保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒。
提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實驗結(jié)果，請放心使用。 水產(chǎn)品（魚﹑蝦﹑蟹）飼料﹑谷物類檢測產(chǎn)品 |
執(zhí)照.jpg)
