細胞周期素D1（Cyclin-D1）ELISA試劑盒說明書 |
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人細胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒說明書 本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定人血清，細胞上清及相關液體樣本中細胞周期素D1(Cyclin-D1)的含量。 實驗原理： 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人細胞周期素D1(Cyclin-D1)水平。用純化的人細胞周期素D1(Cyclin-D1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入細胞周期素D1(Cyclin-D1)，再與HRP標記的細胞周期素D1(Cyclin-D1)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細胞周期素D1(Cyclin-D1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人細胞周期素D1(Cyclin-D1)濃度。 試劑盒組成：
樣本處理及要求： 1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。 2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。 3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。 5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融. 7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟
注意事項：
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標， 在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋 倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值 代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋 倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 試劑盒性能： 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上。 2.批內(nèi)與批見應分別小于9%和11% 保存條件及有效期： 1.試劑盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6個月 |
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