業(yè)執(zhí)照.jpg)
規(guī)格: 100T/96S
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 1mL×1 管，4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑 3mg×1 管，4℃避光保存
H2S 是一種新型氣態(tài)信號(hào)分子，存在于腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)，生理濃度的 H2S 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)海馬的
長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)功能具有重要的調(diào)節(jié)作用，并對(duì)自發(fā)性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過(guò)程發(fā)揮著重要的病理生理效應(yīng)。
H2S 與醋酸鋅、N, N-二甲基對(duì)苯二胺和硫酸鐵銨等反應(yīng)生成亞甲基藍(lán)，亞甲基藍(lán)在 665nm 處有大吸收峰，通過(guò)測(cè)定其吸光值可計(jì)算 H2S 含量。
天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀、微量比色皿或96孔板、蒸餾水。
一、樣品處理：
a. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL
提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
b. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。
c. 血清（漿）：直接測(cè)定。
二、測(cè)定步驟： （取 1.5ml 離心管，按照下表操作）
| 空白管 | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
樣品（μL） |
| 50 | 50 |
蒸餾水（μL） | 50 |
|
|
d. 臨用前將標(biāo)準(zhǔn)品加入1ml試劑一充分溶解則為12.5μmol /mL H2S標(biāo)準(zhǔn)品溶液，稀釋100倍后為0.125μmol /mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液
試劑一（μL） | 50 | 50 | 50 |
充分震蕩混勻 | |||
| |||
試劑二（μL） | 50 | 50 | 50 |
充分震蕩混勻 | |||
試劑三（μL） | 50 | 50 | 50 |
充分震蕩混勻 | |||
試劑四（μL） | 10 | 10 | 10 |
12000rpm，4℃，離心 10min，取200μl上清混勻，25℃靜置20min，于比色皿中，測(cè)定665nm吸光值，記為A空白、A測(cè)定、A標(biāo)準(zhǔn)。 | |||
三、H2S 含量計(jì)算公式：
H2S含量（μmol /mg prot）=0.125×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白) ÷Cpr
H2S含量（μmol /g）=0.125×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白) ÷W
H2S含量（μmol /104 cell）=0.125×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量
H2S含量（μmol /mL）=0.125×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
注意事項(xiàng)：如樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品OD，可稀釋樣本或增大標(biāo)準(zhǔn)品濃度
