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EF39A\K4 2018-01版
黃曲霉毒素B1
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物黃曲霉毒素B1將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗黃曲霉毒素B1抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素B1的含量成負相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物黃曲霉毒素B1的含量。
二、試劑盒特性
飼料 大米、玉米、花生、組織、食用油··········· 2 ppb
黃曲霉毒素B1 ······································ 100%
黃曲霉毒素M1 ······································ 6.6%
黃曲霉毒素B2 ····································· 54.5%
黃曲霉毒素G1 ······································· 8.4%
黃曲霉毒素G2 ······································· 1.7%
飼料 大米、玉米、花生、組織、食用油 ······· 95±35%
1 | 微量測試孔 | 每條8孔，一板12條 | |
2 | 標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶 （1ml/瓶） | 0ppb | 0.02ppb |
0.06ppb | 0.18ppb | ||
0.54ppb | 1.62ppb | ||
3 | 酶標(biāo)記物 | 7ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 20X濃縮復(fù)溶液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器：酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹儀、恒溫箱、打印機
微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道 30～300 µl
試 劑：甲醇、正己烷
五、樣本前處理步驟
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
配液1 樣本復(fù)溶液：
用去離子水將20×濃縮復(fù)溶液按1：19稀
釋（1份20×濃縮復(fù)溶液+19份去離子水）。
配液2 樣本提取液：
將甲醇與去離子水按7:3比例混合均勻（7份甲醇+3份去離子水）。
（a）組織、飼料、大米、玉米樣本處理方法：
樣本稀釋倍數(shù)：40倍
（b）食用油樣本處理方法：
樣本稀釋倍數(shù)：40倍
（c）花生樣本處理方法：
中；加入5ml樣本提取液，再加入4ml正己
烷，充分振蕩3min，20℃ 4000r/min以上離
心10min；
樣本復(fù)溶液，充分振蕩混勻；
3. 取50µl用于分析
樣本稀釋倍數(shù)：25倍
六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含黃曲霉毒素B1量成負相關(guān)。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.02pb為1.816；0.06ppb為1.415；0.18ppb為0.74；0.54ppb為0.313；1.62ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是0.54ppb～1.62ppb；樣本2的濃度范圍是0.06ppb～0.18ppb，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中黃曲霉毒素B1實際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光率（%）＝ | B | ×100% |
B0 |
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中黃曲霉毒素B1實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質(zhì)期
提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣，酶標(biāo)板仍然正常有效，不影響實驗結(jié)果，請放心使用。
農(nóng)業(yè)部生物毒素檢測重點實室 | 聯(lián)合研制 |
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