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萊克多巴胺
快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
一、原理
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物萊克多巴胺將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗萊克多巴胺抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物萊克多巴胺的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物萊克多巴胺的含量。
二、試劑盒特性
組 織 ······································· 0.2ppb
尿 樣 ······································· 0.1ppb
萊克多巴胺（Ractopamine） ···················· 100%
多巴酚丁胺（dobutamine） ····················· < 1%
沙丁胺醇（Salbutamol ） ························ <0.1%
克倫特羅（Clenbuterol）························· <0.1%
組織、尿樣 ···························· 60%~120%
三、試劑盒組成
1 | 微量測(cè)試孔 | 每條8孔，一板12條 | |
2 | 標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶 （1ml/瓶） | 0ppb | 0.05ppb |
0.15ppb | 0.45ppb | ||
1.35ppb | 4.05ppb | ||
3 | 酶標(biāo)記物 | 7ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍(lán)色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 15ml | 白色帽 |
9 | 2X濃縮提取液 | 50ml X 2 | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器：酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）、恒溫箱、打印機(jī)
微量移液器：?jiǎn)蔚?/span> 20～200µl、單道100～1000µl、多道30～300 µl
試 劑：氫氧化鈉、濃鹽酸
五、樣本前處理步驟
（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。
（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
配液1 0.2M 鹽酸
取 17.2ml 濃鹽酸加去離子水定容至 1L。
配液2 1M 氫氧化鈉
稱取4g 氫氧化鈉固體加去離子水定溶至
100ml。
配液3 樣本提取液
2X濃縮提取液用去離子水1：1稀釋。
（a）組織樣本的處理方法
樣本稀釋倍數(shù)： 4倍
注：此方法可與克倫特羅，沙丁胺醇處理方法通用。
（b）尿樣樣本的處理方法
取50µl清亮尿樣直接測(cè)定（如果尿樣渾濁一定要過(guò)濾或4000r/min離心10min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。
樣本稀釋倍數(shù): 1倍
六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
將15ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水
按照1:19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子
水），或按所需用量配制洗滌液。
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含萊克多巴胺量成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.05ppb為1.816；0.15ppb為1.415；0.45ppb為0.74；1.35ppb為0.313；4.05ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb～4.05ppb；樣本2的濃度范圍是0.15ppb～0.45ppb，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺實(shí)際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光率（%）＝ | B | ×100% |
B0 |
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。
八、 注意事項(xiàng)
九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期
提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣，酶標(biāo)板仍然正常有效，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)放心使用。
